α地中海贫血Cs/Qs基因突变检测膜条（CQ Strip）

检测原理

    采用PCR／反向斑点杂交方法(PCR／RDB)检测a -地中海贫血基因突变。PCR扩增待检测样品，得到的PCR产物和膜条上的探针根据碱基互补配对的原理杂交，经酶联显色反应后得到检测结果。若PCR产物和探针完全配对，则膜条上相应探针位置捕获到标有Biotin的PCR产物，并和HRP-Avidin偶联与四甲基联苯胺（TMB）反应呈现较强的深蓝色，若与探针不完全配对，则经严格杂交和洗涤后膜条上相应探针位置不能捕获到标有Biotin的PCR产物，结果无显色反应或显很淡的背景色。

用途

    本试剂盒用于检测a-珠蛋白基因突变,可同时检测常见的HbCS/HbQS(Hb Constant Spring/Hb Quong Sze)基因突变类型，对应膜条探针分布情况：

   Biotin        Qs野生型探针    Qs突变型探针    Cs野生型探针    Cs突变型探针

    
操作步骤

1．PCR扩增
2．杂交检测
3．结果分析
(1)正常结果
 
   Biotin         Qs野生型探针    Qs突变型探针    Cs野生型探针    Cs突变型探针

    
(2)Cs杂合子结果

   Biotin         Qs野生型探针    Qs突变型探针     Cs野生型探针    Cs突变型探针

    
(3)Cs纯合子结果:(a)两条染色体Cs点突变；(b)一条染色体Cs点突变，另一条为片断缺失（如：东南亚缺失）

    Biotin         Qs野生型探针    Qs突变型探针    Cs野生型探针    Cs突变型探针

    
注意事项

1．温度是影响结果的一个重要因素，在高温洗涤时温度应严加控制,控制在56±0.5℃。首次使用水浴恒温振荡器时，应用精确温度计校准。
2．PCR扩增的成功与否及效率高低是影响实验结果的另一个重要因素，建议杂交实验前做电泳检测,检查PCR产物是否特异（条带位置正确）和足量（条带较亮）。
3．膜条在杂交、洗涤、酶联等操作过程中要确保完全浸入液体中，从杂交开始直到显色为止，整个过程中膜条不得干燥。
4．显色反应时往膜条滴加显色液要均匀，显色时间不宜太长，显色时不可晃动，结束后应在纯水中及时漂洗以终止反应，否则会出现显色不均或背景过深的问题。
5．显色反应终止后，如果扫描后分析，扫描应在30分钟内完成(以防褪色)。
6．PCR反应使用的相关塑料用品应高压灭菌，并一次性使用。

常见问题分析

1．PCR扩增没有目的产物,可能原因
(1)确认PCR操作过程没有失误
(2)查看是否是试剂问题
(3)提取的标本DNA浓度比较低，PCR反应可适量增加DNA用量

2．膜条所有位点均无斑点或显色很弱,可能原因
(1) 扩增产物条带较弱
(2) 杂交温度过高，杂交时间过短
(3) 高温洗涤温度过高
(4) 显色时间不够

3．膜条某些位点出现非特异性低背景斑点,可能原因
(1) 高温洗涤温度较低，或洗膜不够充分
(2) 显色时间过长

若出现问题不能解决时，请与本公司售后服务工程师及时联系，寻求技术支持。

订货信息

货号/规格	产品	项目
DG010012/20T	α地中海贫血Cs/Qs基因突变检测膜条（2个位点）	-Cs,Qs