β地中海贫血基因突变检测微点阵膜

检测原理
    采用PCR／反向斑点杂交方法(PCR／RDB)检测β-地中海贫血基因突变。PCR扩增待检测样品，得到的PCR产物和膜条上的探针根据碱基互补配对的原理杂交，经酶联显色反应后得到检测结果。若PCR产物和探针完全配对，则膜条上相应探针位置捕获到标有Biotin的PCR产物，并和Avidin - HRP偶联，再与四甲基联苯胺（TMB）反应呈现较强的深蓝色，若与探针不完全配对，则经严格杂交和洗涤后膜条上相应探针位置不能捕获到标有Biotin的PCR产物，结果无显色反应或显很淡的背景色。

用途
本试剂盒用于检测β-珠蛋白基因突变,以下是可检测的突变位点(膜条版本号:BT18)
-29    -28    CD17     CD26     CD41/42   CD43     CD71/72+A   IVS-II-654    CD31 
-32    -30    +40~+43  CD14/15  CD27/28   IVS-I-1  CD71/72+T   IVS-I-5       Initial Codon
    
    
操作步骤

1．PCR扩增
2．杂交检测
3．结果分析
    打开Ministrip专用分析软件，进行结果分析（使用方法详情见软件使用说明书）。

注意事项

1．在运输过程中可能会有PCR预混液附着在管壁或管盖上，使用前请离心。
2．PCR预混液中含有酶，不需要另外加入。
3．温度是影响结果的一个重要因素，在杂交和高温洗涤时温度应严加控制,控制在52±0.5℃。首次使用水浴恒温振荡器时，应用精确温度计校准。
4．PCR扩增的成功与否及效率高低是影响实验结果的另一个重要因素，建议杂交实验前做电泳检测,检查PCR产物是否特异（条带位置正确）和足量（条带较亮）。
5．Avidin-HRP请4℃保存，膜条请室温干燥存放。
6．膜条在杂交、洗涤、酶联等操作过程中要确保完全浸入液体中，从杂交开始直到显色为止，整个过程中膜条不得干燥。
7．显色反应时往膜条滴加显色剂要均匀，显色时间不宜太长，显色时不可晃动，结束后应在纯水中及时漂洗以终止反应，否则会出现显色不均或背景过深的问题。
8．显色反应终止后，如果扫描后分析，扫描应在30分钟内完成(以防褪色)。
9．PCR反应使用的相关塑料用品应高压灭菌，并一次性使用。

常见问题分析

1．PCR扩增没有目的产物,可能原因
(1)PCR操作过程失误
(2)试剂失效或被污染
(3)提取的标本DNA浓度比较低，PCR反应可适量增加DNA用量

2．膜条所有位点均无斑点或显色很弱,可能原因
(1) 扩增产物条带较弱
(2) 杂交温度过高，杂交时间过短
(3) 高温洗涤温度过高
(4) 显色时间不够

3．膜条某些位点出现非特异性低背景斑点,可能原因
(1) 高温洗涤温度较低，或洗膜不够充分
(2) 显色时间过长

若出现问题不能解决时，请与本公司负责售后服务的工程师及时联系，寻求技术支持。

订货信息

货号/规格	产品	项目
DG020012/20T	β地中海贫血基因突变检测微点阵膜（18个位点）	CD41/42、-28、-29、IVS-II-654、CD17、CD43、CD71/72 (+A)、CD27/28,CD71/72 (+T)、IVS-I-1、IVS-I-5、CD26、CD14/15、-32、-30、CD31、+40~+43、Initial Codon